TP Enzymologie

Effet de la concentration d'enzyme sur l'activité enzymatique de la glucose oxydase

Madame Françoise Germany-Labridy; Lycée Schoelcher

Résultats de TP obtenus par les élèves d'une classe de 1ère S du Lycée Schoelcher en janvier 2004 à partir de protocoles élaborés et testés par leur professeur en colaboration avec le personnel de laboratoire.

Effet de la concentration en substrat sur l'activité de la Glucose Oxydase

Matériel

•  Chaîne EXAO avec logiciel ENZYMO
• Solution de glucose oxydase de concentrations différentes en UA : C, C/2 ; C/4 ; C/10.
• Solution de glucose de concentration 5g /L.
• Pipette ou seringue de 10 ml.
• Seringues avec cathéter pour injection du GOD (une pour chaque solution).

Protocole expérimental

I) Mesure de la variation de la concentration de dioxygène et de produits formés en fonction de la concentration d'enzyme (Doc 1)

1- Placer dans le bioréacteur 10 ml de solution de glucose à 5g/L.

2- Choisir le module " oxymétrie" dans le logiciel "Enzymo ". Choisir les paramètres :

• Les unités en mg/L,
• La durée : 3 minutes.
• Evolution des mesures en fonction de [Enzyme] pour "concentration d'enzyme ".

3- Mettre en route l'agitateur.

4- Laisser la concentration se stabiliser dans le bioréacteur pendant 30 secondes avant de lancer la mesure en cliquant sur "démarrer".

5- Au bout de 30 secondes à 1 minute, injecter dans le réacteur 0.2 ml d'une solution d'enzyme glucose oxydase. Marquez l'instant de l'injection par un repère.

6- Rincer soigneusement l'ensemble du matériel utilisé (réacteur et couvercle, capteur dioxygène, pipettes) .

7- Répétez les étapes 1 à 6 de la manipulation avec la solution de glucose à 5g/L et les solutions concentrations différentes en UA : C, C/2 ; C/4 ; C/10. en conservant le graphe précédent. Rincer soigneusement l'ensemble du matériel utilisé (réacteur et couvercle, capteur dioxygène, pipettes) .

8- Enregistrer les résultats mais les conserver à l'écran.

 

2) Etude de la vitesse de la réaction enzymatique (Doc 2).

1- Ouvrir le fichier contenant vos résultats (s'ils ne sont pas corrects, utiliser les documents d'appoint ou fichier indiqué).

2 - Dans le menu "outils" choisir "droite" pour évaluer le coefficient directeur de chaque courbe.

3 - Sélectionner courbe C puis placer le réticule " " au début de sa pente et cliquer-glisser pour obtenir la valeur du coefficient directeur. Fixer alors la valeur de la [Enzyme] à 10 UA.

4 - Répéter l'opération "3" pour chaque courbe et fixer les [Enzyme] correspondantes, soit 5 UA, 2,5 UA et 1 UA.

5 - Choisir l'onglet "graphe paramétrique" pour visualiser le graphe correspondant et ajuster les échelles puis enregister vos résultats.

Résultats

Doc 1 ; Effet de la concentration enzymatique sur l'activité de la glucose oxydase.

Doc 2 : Vitesse de la réaction enzymatique en fonction de la concentration d'enzyme.

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